华体会体育网站赞助国米:如何高效进行石蜡包埋组织DNA提取？

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  在分子病理学及基因组学研究中，石蜡包埋组织（Formalin-Fixed Paraffin-Embedded，FFPE）是临床与科研中常用的样本保存形式，其保存的DNA承载关键疾病分子信息，能否高效提取DNA将直接影响下游实验的准确性与可靠性。然而，在从中提取高质量DNA的过程中，研究者普遍面临诸多技术瓶颈，如DNA片段断裂与降解、蛋白质交联阻碍完整DNA释放、以及提取后难以通过PCR或RT-qPCR成功扩增目标片段等问题。本文旨在剖析以上问题的成因，并提出若干高效提取FFPE组织DNA的系统性策略。

  甲醛作为固定液的核心成分，在有效固定组织形态的同时，亦会诱导蛋白质与DNA之间形成交联结构，导致DNA链脆性增加，在后续机械处理过程中易于发生断裂。此外，固定过程中甲醛可氧化为甲酸，其酸性环境会促进加剧DNA的化学降解。石蜡包埋过程中的高温处理以及脱蜡步骤中使用的有机溶剂，亦会对DNA完整性造成不可逆损伤。

  为维持石蜡包埋切片的形态稳定性，组织常经过加热、紫外线照射或化学交联处理，这些过程促使DNA与组蛋白及其他白形成稳定的共价连接。此类交联结构严重阻碍DNA的释放与纯化，常需通过特异性解交联步骤方可恢复DNA的可提取性。

  FFPE组织中常残留多种PCR抑制物，包括固定过程中引入的染料小分子、降解产生的寡核苷酸碎片、以及未被完全去除的蛋白质、脂质等杂质。此外，脱蜡不彻底或脱蜡剂残留也会对后续酶促反应产生显著干扰，影响下游分子检测的灵敏度与特异性。

  为减少DNA在提取过程中的二次损伤，建议避开使用操作繁琐且易导致酸性环境的传统酚/氯仿法。目前，多家生物技术公司已推出专为FFPE组织设计的DNA提取试剂盒如Qiagen、BIOG的DNA FFPE Tissue Kit，其优化后的缓冲体系与纯化柱技术可在温和条件下高效回收DNA，明显提高提取成功率与完整性。

  蛋白质–DNA交联的有效解除是获取完整DNA的关键环节。传统的方式一般都会采用合适浓度硫酸过夜溶解或高温过夜温浴的方法，但整体时间比较久，且硫酸具有强腐蚀性，不仅有较高的操作安全风险隐患还可能会引起DNA遭到破坏。BIOG的石蜡包埋DNA提取试剂中含有专门优化的裂解液和消化液，能够迅速彻底的去除DNA交联和已经降解的小片段DNA，最大限度地帮助释放DNA，明显提升DNA的提取效率。

  优质的FFPE DNA提取试剂盒通常包含多步洗涤与纯化流程，可有效吸附并去除蛋白质、脂类及小分子抑制物。选用经验证可靠的品牌产品，如有较长研发历史及良好用户反馈的试剂系统，有助于保障提取DNA的纯度与适用性，为后续高通量测序、数字PCR等精密分析奠定基础。

  总之，石蜡包埋组织样本因其固有的制备与保存特性，在DNA提取之前往往经历长期存档，导致组织内DNA都会存在不同程度的片段化、降解及杂质混杂等问题。因此，采用高效的DNA纯化技术显得很关键。选择经过优化的提取方法，并配合使用专为石蜡包埋组织设计的核酸提取试剂，不仅仅可以明显提升DNA的得率与完整性，也可为后续分子检测与分析提供较为可靠的基础，以此来实现事半功倍的研究效果。

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